Senin, 11 November 2013

Produksi iPSCs

Dedifferentiation untuk totipotency atau pluripotency: ikhtisar metode. Berbagai metode yang ada untuk kembali ke sel somatik dewasa pluripotency atau totipotency. Dalam kasus totipotency, pemrograman ulang dimediasi melalui oosit II matang metafase seperti dalam transfer sel somatik nuklir (Wilmut et al., 1997).

Karya terbaru telah menunjukkan kelayakan zigot enucleated atau blastomer awal kimia ditangkap selama mitosis, sehingga istirahat amplop nuklir bawah terjadi, untuk mendukung pemrograman ulang untuk totipotency dalam proses yang disebut kromosom transfer (Egli dan Eggan, 2010). Metode pemrograman langsung mendukung pengembalian ke pluripotency, meskipun, kendaraan dan biotipe bervariasi dalam efisiensi (Takahashi dan Yamanaka, 2006). Viral-dimediasi transduksi kokoh mendukung dedifferentiation untuk pluripotency melalui rute retroviral atau DNA-virus tetapi membawa tanggung jawab dari inaktivasi insersional. Selain itu, epigenetik pemrograman ulang oleh ekspresi paksa OSKM melalui rute DNA ada seperti DNA plasmid, minicircles, transposon, episomes dan DNA mulicistronic membangun menargetkan oleh rekombinasi homolog juga telah ditunjukkan, namun, metode ini menderita beban berpotensi mengubah genom penerima oleh gen penyisipan (Ho et al., 2010).

Sementara protein-dimediasi transduksi mendukung pemrograman ulang sel-sel dewasa untuk pluripotency, metode ini rumit dan membutuhkan ekspresi protein rekombinan dan keahlian pemurnian, dan reprograms meskipun pada frekuensi sangat rendah (Kim et al., 2009). Sebuah kendala utama menggunakan RNA untuk pemrograman ulang lability dan bahwa RNA beruntai tunggal biotipe memicu jalur pertahanan bawaan antivirus seperti interferon dan NF-kB-dependent jalur. Dalam RNA ditranskripsi vitro, modifikasi menstabilkan mengandung seperti 5-methylguanosine capping atau diganti ribonucleobases, misalnya pseudouracil, adalah 35 kali lipat lebih efisien daripada transduksi virus dan memiliki manfaat tambahan tidak mengubah genom somatik (Warren et al., 2010).
Sebuah gol menyeluruh metode pemrograman ulang untuk menggantikan gen dengan molekul kecil untuk membantu dalam pemrograman ulang.

Koktail ada telah diidentifikasi untuk benar-benar memprogram ulang sel-sel dewasa untuk totipotency atau pluripotency, namun banyak contoh ada yang meningkatkan efisiensi keseluruhan proses dan dapat menggantikan satu atau lebih gen dengan rute langsung memprogram ulang (Feng et al, 2009;. Zhu et al. , 2010).

Sebuah skema generasi batang pluripotent (IPS) sel. Mengisolasi dan budaya sel donor. Transfect stem cell-terkait gen ke dalam sel dengan vektor virus. Sel darah merah menunjukkan sel-sel mengekspresikan gen eksogen. Panen dan budaya sel sesuai dengan kultur sel ES, menggunakan sel feeder mitotically tidak aktif (lightgray). ) Sebuah subset kecil sel transfected menjadi sel iPS dan menghasilkan ES-seperti koloni.
Sel iPS biasanya diperoleh transfeksi gen induk tertentu terkait sel menjadi non-pluripotent sel, seperti fibroblas dewasa, meskipun teknik ini menjadi kurang populer karena diketahui menjadi rentan terhadap pembentukan merangsang kanker. Transfeksi biasanya dicapai melalui vektor virus, seperti retrovirus. Gen transfected termasuk regulator master transkripsi Oct-3/4 (Pou5f1) dan Sox2, meskipun disarankan agar gen lain meningkatkan efisiensi induksi. Setelah 3-4 minggu, sejumlah kecil sel transfected mulai menjadi morfologi dan biokimia mirip dengan sel-sel induk berpotensi majemuk, dan biasanya terisolasi melalui seleksi morfologi, penggandaan waktu, atau melalui gen pelapor dan seleksi antibiotik.